1.微載體培養

準備消化好的細胞，將先前製備好的微載體加入方瓶或反應器（微載體添加量3-5g/L），在一定條件下開始培養，4小時後觀察細胞貼壁。如果細胞黏附良好，繼續培養並觀察細胞生長。

微載體培養操作要點

(1)培養初期：確保培養基和微球處於穩定的pH和溫度水平，將細胞（對數生長期，非穩定期）接種至培養基最終體積的1/3，以增加細胞和微載體接觸的機會。常採用2-3g/L的微載體含量，較高的微載體濃度需環境控製或頻繁換液。

由於動物細胞沒有細胞壁，對剪切力敏感，因此不可能透過提高攪拌速度來增加接觸機率。通常的操作方法是在黏附階段使用低攪拌速度並始終攪拌。幾小時後，當細胞附著到微載體表面時，停止攪拌過程。相反，當細胞進入培養階段時設定低速。微載體培養物的攪拌速度很慢，最高轉速為75r/min。

(2)貼壁階段(3-8h)後，將培養基緩慢添加至工作體積，並提高攪拌速度，以確保完全均勻混合。

(3)培養維持期：細胞計數(細胞核計數)、葡萄糖測定和細胞形態鏡檢。隨著細胞增殖，微球越來越重，需要加大攪拌速度（不同培養時間載體細胞照片如圖1至圖3）約3天后，培養基開始呈酸性並需要改變。具體方法：停止攪拌，讓Cell Dex靜置5分鐘，棄去適量培養液，緩慢加入新鮮培養液（37℃），重新開始攪拌。
(4) 收穫細胞（此消化方法可能需要使用胰酶消化器離線滅菌）
A.將待消化的細胞經由無菌管道送入近乎滅菌的微載體消化池中。培養基透過微載體消化器的過濾系統從消化器排出，細胞過度生長的微載體被保留在微載體消化器上方。
B.將剩餘載體1~5倍體積的不含鈣鎂的PBS加入微載體消解器中，打開消解器的攪拌系統，使PBS與微載體充分接觸，持續攪拌後排出不含鈣鎂的PBS 3 ~5分鐘。
C、依B相同方法用PBS重複清洗兩次，排出不含鈣鎂的PBS
D、將含0.02%EDTA的PBS溶液加入PBS清洗過的微載體中，37℃持續攪拌約10分鐘後出料
E、加入含有0.125%胰蛋白酶和0.02%EDTA的胰蛋白酶75-125r/min，快速攪拌20-30min（在顯微鏡下觀察消化時間，當載體上沒有細胞時消化停止）。

F.消化後，將消化後的細胞經由消化器的排水管轉移到更大的生物反應器。
(5)微載體培養的放大：可以透過增加微載體的含量或培養體積來放大。利用非整倍體或原代細胞培養生產疫苗和乾擾素已放大至4000L以上。

2，存放

貯存於4~25℃乾燥、通風、清潔處。

3。 運輸

運送時應避免日曬、雨淋、重壓，嚴禁與有毒有害物品混運。

4.注意事項

避免接觸氧化劑。

5.訂購說明

Celldex 以乾粉形式提供，使用前必須進行水合和滅菌。

圖1. CellDex1培養24小時Vero細胞的顯微照片

圖2. CellDex1培養48h的Vero細胞顯微照片（320 x）

圖3. Vero細胞在CellDex1中培養72小時的顯微照片（320 x）