關鍵要點
- 了解單細胞分離在創建純 mAb 生產細胞系中的關鍵作用。
- 發現有限稀釋技術的缺點(效率低、耗時、資源密集)。
- 探索 CellGem 用於單細胞捕獲和後續培養的創新微流體技術。
- 了解 CellGem 如何使用最少的試劑和傳統實驗室設備簡化單細胞分離。
單克隆抗體 (單株抗體)通常用於診斷和治療許多疾病,例如癌症。單株抗體是由免疫細胞產生的,這些免疫細胞是獨特親代細胞的克隆。 mAb 是透過將 B 細胞(從免疫小鼠中分離出來)與永生骨髓瘤細胞系融合而產生的。由此產生的融合細胞(稱為雜交瘤)會產生抗體。篩選雜交瘤以選擇具有最所需抗體特異性的克隆。這些單獨克隆的產物是單株抗體。
單株抗體生產中單細胞的分離是一個重要的步驟。這 有限稀釋技術 是此應用中最常見的方法之一,涉及連續稀釋原理。目標是將細胞懸浮液稀釋至單一微孔中僅分離出單一細胞的程度。在該技術中,播種密度非常關鍵。如果使用低接種密度,這將增加空孔的數量,從而導致時間和耗材的浪費。
相反,如果細胞接種密度較高,則一孔中出現多個細胞的可能性較高,並且不能保證獲得的克隆來自單個細胞,因為難以通過顯微鏡識別。因此,通常進行幾次有限稀釋,以達到生產良好單株細胞系的良好效率。

CellGem – 一種基於微流體的新型單細胞分離技術
在這裡,我們描述一個 單細胞分離的新方法. 細胞寶石是一種一次性晶片,可以使用傳統的微量移液器和顯微鏡分離、驗證和擴增單細胞以形成單克隆細胞集落。
CellGem 是一種簡單、易於使用的微流控晶片,需要最少的試劑消耗。該晶片由 60 個孔陣列組成,細胞捕獲孔位於晶片的一側,細胞培養孔位於另一側。簡單地說,將細胞懸浮液加載到晶片上,所需大小的細胞將落入捕獲孔中,而其他未捕獲的細胞將被洗掉。然後翻轉晶片,使捕獲的單細胞落入培養孔中。然後在這些孔中培養單細胞以形成單細胞集落,然後收穫並轉移到常規培養器皿中。由於微流控系統,單細胞可以培養更長時間且存活率更高。
這種基於微流控晶片的創新方法用於分離單株細胞系,成本低且成本低。
時間有效,是限制稀釋或螢光活化細胞的更好替代方法
分選(FACS)需要專門的設備。

想要了解更多有關不同單細胞分離技術的信息,請查看我們的相關部落格“7 種單細胞分離技術“
參考
- 亞特蘭提斯生物科學。 7 種單細胞分離技術。 14 年 2022 月 XNUMX 日。 7 種單細胞分離技術 – ATLANTIS BIOSCIENCE
- 葉CF、林CH、張HC、唐CY、賴PT、許CH。用於生成單克隆細胞的微流控單細胞克隆 (SCC) 裝置。細胞。 2020;9(6):1482。發佈於 2020 年 18 月 10.3390 日。