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CellBrite™ 穩定膜染色套件

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將活的 MCF7 細胞以 1X CellBrite™ Steady 650 或 CellBrite™ Steady 685 染料染色，並與 0.2X 增強劑共同孵育長達三天。無需洗滌步驟，即可透過共聚焦顯微鏡對細胞進行成像。
與 CellMask™ Green 相比，CellBrite® Steady 染色劑更穩定，適用於即時活細胞成像。將 MCF7 活細胞在 37°C 下以含 CellBrite® Steady Enhancer 的 1X CellBrite™ Steady 488 染色劑在完全培養基中進行染色，無需洗滌步驟。
使用親脂性碳菁染料 Neuro-DiO、DiI 或 DiD 或 CellBrite® 穩定膜染料和增強劑對活的 HeLa 細胞進行染色。親脂性碳菁染料會迅速被細胞內吞，因此表面染色必須在短時間內成像。 CellBrite® 穩定染料可均勻地對細胞膜進行染色，使用增強劑後，表面染色可清晰成像長達 24 小時。
CellBrite® 穩定膜染色試劑盒 - 圖 5：使用 CellBrite™ 穩定染料（含或不含增強劑）對活細胞染色效果的比較。將活的 HeLa 細胞染色指定時間。 24 小時內，染料在質膜和細胞內區室之間達到平衡。與增強劑共同孵育或後處理可掩蓋細胞內染色，從而實現對細胞邊界的選擇性成像。無需洗滌步驟，即可透過共聚焦顯微鏡對細胞進行成像。
CellBrite™ 穩定染料在甲醇中的激發光譜和發射光譜。
將活的 HeLa 細胞與 CellBrite™ Steady 488（綠色）和增強劑以及 NucSpot® Live 650（洋紅色）共染色 45 分鐘。無需洗滌步驟，即可透過共聚焦顯微鏡對細胞進行成像。
HeLa 細胞與 CellBrite® Steady 488（綠色）和 MitoView™ 633 粒線體染料（洋紅色）共染色。
CellBrite® Steady 膜染色試劑盒 - 圖 7：使用 CellBrite™ Steady 染料和增強劑進行長期染色。 MCF7 細胞以 1X CellBrite™ Steady 405 或 CellBrite™ Steady 488 染料染色，並與 0.2X 增強劑共培養長達六天。無需洗滌步驟，即可透過共聚焦顯微鏡對細胞進行成像。
將活的 MCF7 細胞用 CellBrite® Steady 染料染色 30 分鐘，然後透過共聚焦顯微鏡成像，無需洗滌步驟。
富集的細胞外囊泡（EVs）以 0.5 μM C​​ellBrite® Steady 650 染色（右圖）。與緩衝液中的 CellBrite® Steady 650（左圖）相比，觀察到特異性染色。使用 Cytoflex LX 流式細胞儀在 APC 通道中檢測 EVs。
富集的細胞外囊泡（EVs）以 0.5 μM C​​ellBrite® Steady 550 染色（右圖）。與緩衝液中的 CellBrite® Steady 550（左圖）相比，觀察到特異性染色。使用 Cytoflex LX 流式細胞儀在 PE 通道中檢測 EVs。
富集的細胞外囊泡（EVs）以 0.5 μM C​​ellBrite® Steady® 488 染色（右圖）。與緩衝液中的 CellBrite® Steady® 488（左圖）相比，觀察到特異性染色。使用 Cytoflex LX 流式細胞儀在 FITC 通道中檢測 EVs。
以 0.02X CellBrite® Steady 405 染色經 SEC 純化的 MCF-7 來源外泌體（右圖）。與緩衝液中的 CellBrite® Steady 405（左圖）相比，觀察到特異性染色。使用 Cytoflex LX 流式細胞儀在 Pacific Blue 通道中檢測 EVs。
CellBrite® Steady 膜染色試劑盒 - 圖 10：富集的細胞外囊泡 (EV) 以 0.5 μM C​​ellBrite® Steady 405 染色（右圖）。與緩衝液中的 CellBrite® Steady 405（左圖）相比，觀察到特異性染色。使用 Cytoflex LX 流式細胞儀在 Pacific Blue 通道中檢測 EV。

CellBrite™ 穩定膜染色套件

CellBrite® 穩定膜染色試劑盒可標記活細胞膜，染色效果明亮均勻，且表面保留性較佳。 24小時或更長時間性能優於快速內化的染料。

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活細胞表面膜染色，染色效果可持續24小時或更長

CellBrite® 穩定膜染色試劑盒可達到明亮、均勻的染色效果。 活細胞膜染色 仍然有用 24小時或更長時間有助於在長時間成像過程中保持清晰的細胞邊界。與許多會迅速內化並失去表面清晰度的膜染料不同，CellBrite® 穩定染料能夠長時間保持膜輪廓清晰。當需要更清晰的表面訊號時，可使用隨附的 CellBrite® 穩定增強劑 可以掩蓋細胞內螢光，從而改善細胞輪廓的可視化效果。

產品特色

  • 與許多能迅速被細胞內化的膜染料相比，它在細胞表面的保留時間更長。
  • 根據細胞類型和增殖情況，可對活細胞膜進行24小時或更長時間的成像。
  • 可選增強劑可降低細胞內訊號，從而獲得更清晰的膜邊界
  • 在完全培養基中快速均勻染色
  • 色域寬廣，從藍色到近紅外線，並相容於 STORM 系統（550、650、685）。
  • 在培養基中連續培養毒性低，並附有增強劑使用指南

 

套件組件

試劑盒規格是基於 200 µL 的標記體積。

套件尺寸 元件 濃度/形式 體積
試用裝（100個標籤） CellBrite® 穩定染料 1000X，DMSO 中 20μL
CellBrite® 穩定增強劑 1000X，DMSO 中 20μL
全尺寸（500 個標籤） CellBrite® 穩定染料 1000X，DMSO 中 100μL
CellBrite® 穩定增強劑 1000X，DMSO 中 100μL

 

與 CellMask™ Green 相比，CellBrite® Steady 染色劑更穩定，適用於即時活細胞成像。將 MCF7 活細胞在 37°C 下以含 CellBrite® Steady Enhancer 的 1X CellBrite™ Steady 488 染色劑在完全培養基中進行染色，無需洗滌步驟。
對於即時活細胞成像而言，CellBrite® Steady 染色比 CellMask™ Green 更穩定。將 MCF7 活細胞置於完全培養基中，於 37°C 下以 1X CellBrite™ Steady 488 和 CellBrite® Steady Enhancer 染色，無需洗滌步驟。染色後培養 72 小時，並在所示時間點進行成像。對於 CellMask™ Green 染色，則依照製造商的建議進行染色。將細胞以 HBSS 緩衝液稀釋 1:1000 的染料在 37°C 下染色 10 分鐘，然後用緩衝液沖洗，最後加入新鮮培養基。培養 72 小時後，並在所示時間點進行成像。
使用親脂性碳菁染料 Neuro-DiO、DiI 或 DiD 或 CellBrite® 穩定膜染料和增強劑對活的 HeLa 細胞進行染色。親脂性碳菁染料會迅速被細胞內吞，因此表面染色必須在短時間內成像。 CellBrite® 穩定染料可均勻地對細胞膜進行染色，使用增強劑後，表面染色可清晰成像長達 24 小時。
使用親脂性碳菁染料 Neuro-DiO、DiI 或 DiD 或 CellBrite® 穩定膜染料和增強劑對活的 HeLa 細胞進行染色。親脂性碳菁染料會迅速被細胞內吞，因此表面染色必須在短時間內成像。 CellBrite® 穩定染料可均勻地對細胞膜進行染色，使用增強劑後，表面染色可清晰成像長達 24 小時。

客戶回饋如下：

「這種染料在我使用過程中表現非常出色——實際上比CellMask更好。它更亮，能更清晰地顯示細胞膜，而且整體穩定性非常好。操作步驟簡單明了，我沒有遇到任何背景或毒性問題。”

推薦用例

  • 用於共聚焦和寬場顯微鏡的活細胞膜輪廓描繪
  • 在細胞攝取研究中，膜的定義必須隨時保持清晰
  • 405奈米至近紅外線多色成像面板
  • STORM 使用 Steady 550、650 或 685 進行超解析度成像
  • 純化的細胞外囊泡標記，以下提供磁珠結合形式的指導。

成功秘笈

  • 染色後清洗對於共聚焦成像是可選的，但對於落射螢光成像而言則是必要的。
  • 對於可見光範圍內的染料（405、488、550），無需洗滌的共聚焦成像可能需要明場或其他標記物進行初始聚焦。
  • 高濃度增強劑可能對某些細胞類型有毒性；建議在染色後添加或使用最低有效濃度。
  • 使用遠紅光 Steady 650 和 Steady 685 時，增強遮罩效果往往更佳。

 

重要注意事項

  • 僅適用於活細胞染色。不適用於已固定細胞的染色。
  • 甲醛固定法最初能保留訊號，但訊號在儲存過程中會發生重新分佈；甲醇和洗滌劑不耐受。
  • 增強劑不能耐受固定。如果用增強劑處理過的細胞被固定，則掩蔽效應消失，細胞內螢光會恢復。
  • 不建議用於細胞追蹤、共培養或移植，因為染料會在細胞間轉移。
  • EV標記：已驗證可用於純化的EV，但可能非特異性地結合到磁珠結合的外泌體上；對於磁珠結合和純化的EV，請考慮 ExoBrite™ True EV 膜染色劑


P/s：Biotium 產品僅在新加坡和泰國銷售

技術文件

協議：

CellBrite™ Steady 膜染色試劑盒實驗方案 

MSDS： 

CellBrite™ 穩定膜染色試劑盒 MSDS

產品簡介： 

CellBrite™ 穩定膜染色試劑盒手冊 

常見問題：

CellBrite™ Steady 膜染色試劑盒常見問題

變化

產品 前/後 雷射線（奈米） 檢測通道 試驗規模（100 個標籤） 全尺寸（500 個標籤）
CellBrite® Steady 405 膜染色試劑盒 406/428 405 數據接口 30105-T 30105
CellBrite® Steady 488 膜染色試劑盒 505/529 488 國際貿易委員會 30106-T 30106
CellBrite® Steady 550 膜染色試劑盒 562/579 555或561 TRITC 或羅丹明 30107-T 30107
CellBrite® Steady 568 膜染色試劑盒 569/586 555或561 Alexa Fluor® 568 30150-T 30150
CellBrite® Steady 594 膜染色試劑盒 580/615 555，561或594 德州紅® 30142-T 30142
CellBrite® Steady 650 膜染色試劑盒 656/676 640 Alexa Fluor® 647 30108-T 30108
CellBrite® Steady 685 膜染色試劑盒 686/708 685 Alexa Fluor® 680 30109-T 30109
CellBrite® Steady 750 膜染色試劑盒 755/789 730 Alexa Fluor® 750 30141-T 30141

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