---

球體已成為推進生物醫學研究的強大工具，其應用範圍從藥物篩選和毒性測試到疾病建模和組織工程。為了使用球體獲得可靠且可重複的結果，使用正確的培養系統並遵循正確的技術至關重要。在本指南中，我們將介紹從開始到結束培養完美球體的最佳方法和協議。

細胞培養中的球體是什麼？

球體是一種三維 (3D) 結構，由在培養板中生長時形成的細胞組成。球體常用於細胞分析，提供多種 生理優勢 這些都受到傳統二維單層培養物的損害。它們有效地模擬了生理上經歷的 3D 微環境，因此可以更準確地預測藥物反應和細胞行為。

培養球體所涉及的步驟

球體培養可分為 四個主要步驟 – 播種、聚集、維護和收穫。接種是將單一細胞或多個細胞團塊放置在培養板表面並允許它們彼此附著形成團塊的過程。然後細胞聚集在一起形成球體，培養 2-5 天後可見。一旦形成，應定期更換培養基以保持球體新鮮和健康。最後，當球體足夠大時，可以使用移液等方法收穫它們。

成功球體形成的協議

為了確保球體的成​​功形成和維護，重要的是要專注於該過程的所有四個階段：播種、聚集、維護和收穫。傳統上，接種是使用實驗室製造的或市售的細胞接種板和工具來實現均勻、高密度的接種。此外，選擇具有低黏附特性的板可以減少非特異性附著並最終產生改進的球體。

聚集通常在 33-37°C 的培養箱中進行，為細胞生長和存活提供最佳條件。如果細胞不易聚集或黏附特性低，則聚集可能具有挑戰性。此步驟對於確定球體的大小和形狀也至關重要。球體的尺寸和形狀均勻對於許多應用都很有用，但要實現這一點可能很困難，特別是對於傾向於形成不規則形狀或大球體的細胞類型。

此外，保持適當的培養基循環速度有助於保持內容物新鮮，同時為球體的持續發育提供充足的營養。最後，需要採用仔細的收穫技術，以便在下游應用之前保持球體的結構完整性。

影響球體特性的因素

在優化球體培養時，有許多因素會影響球體的生長。這些包括試劑和培養基成分、細胞類型和數量、培養/培養箱條件（如溫度、濕度、二氧化碳水平）、培養微環境以及添加特定培養試劑（如生長因子或細胞外基質）。此外，培養容器的選擇也很重要，它會影響球體的大小和形狀，專用的球體培養板旨在促進球體的形成和均勻性。例如，與靜態板相比，使用旋轉燒瓶或旋轉容器可以改善形態，因為旋轉可以更好地獲取營養物質並增加氧氣擴散。最後，透過化學處理或蛋白質塗層控制常見組織培養塑膠的表面特性也可能有助於提高活力並產生更均勻的球體。

觀察和測量球體質量的方法

球體培養的成功可以透過評估所產生的球體的品質來衡量。品質控制通常被視為尺寸、形狀和細胞活力的組合。用於觀察這些的測量技術包括明場顯微鏡、相差成像 (PCI) 和螢光顯微鏡 (FM)。明場顯微鏡是一種廣泛使用的方法，因為它是非破壞性的，並且可以提供定性資訊來評估球體尺寸和形狀的均勻性。 PCI 具有比 BR 更好的分辨率，但在調整影像或量化個體或群體值時缺乏對比度。 FM 提供定量結果，但需要用螢光探針進行預標記，這可能會由於探針攝取或附著在細胞表面受體上而導致細胞死亡增加。

為您的 3D 培養選擇正確培養容器的提示。

選擇正確的球體培養板對於成功完成球體培養實驗至關重要。市面上有各種類型的球體培養板，具有不同的功能和優點。選擇球狀培養板時，請考慮細胞類型、預期應用和培養方法等因素。例如，一些球狀培養板針對懸滴培養進行了最佳化，而另一些則針對旋轉培養或靜態培養進行了設計。專用球體培養板還可以具有表面塗層或凹槽，以促進球體形成和均勻性。此外，培養板中孔的大小和數量會影響球體的大小和產量。選擇與您的細胞類型和培養方法相容並具有促進球體形成和均勻性的必要功能的球體培養板至關重要。

由於我們專注於幫助研究人員輕鬆適應和改進他們從實驗室到床上的工作，因此我們一直在尋找可輕鬆用於轉化科學應用的 3D 培養容器。我們發現了一個專門的球體培養板 庫格爾邁爾斯有限公司 是瑞士蘇黎世大學的衍生公司，專注於開發再生醫學、細胞療法、發育生物學和移植手術技術。他們的 Sphericalplate 5D 可以輕鬆控制和形成均勻的圓形球體，細胞間通訊不受干擾，以防止不必要的基因表現和分化。