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背景自发荧光是细胞和组织免疫荧光成像的主要问题，使成像分析变得复杂。 TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher是Biotium研发的创新试剂，可有效淬灭组织切片中的脂褐素自发荧光，也有助于减少细胞外基质等其他来源的自发荧光。  

传统上，苏丹黑 B 用于淬灭脂褐素自发荧光。 然而，苏丹黑 B 还在红色/远红色通道中引入了非特异性背景荧光。 另一方面，TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 不仅可以掩盖脂褐素的自发荧光，还可以最小程度地增加红色/远红外背景荧光。 TrueBlack® 脂褐素自发荧光淬灭剂处理与传统染色兼容。 它可以在免疫染色之前或之后进行，并且对荧光抗体或核复染剂的信号影响最小，从而保持免疫染色的信噪比。

TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 已在多个同行评审的出版物中得到验证，并广泛用于多种应用，尤其是在神经科学研究中。 以下是一些在不同神经元细胞类型和组织中使用 TrueBlack® 脂褐素自发荧光淬灭剂的研究报告。

TrueBlack® Lipofuscin 自发荧光淬灭剂可有效减少小胶质细胞中的自发荧光

Zhang, H., Tan, C., Shi, X., & Xu, J. (2022)。 自发荧光对基于荧光的技术研究小胶质细胞的影响。 BMC 神经科学，23(1)，1-12。 https://doi.org/10.1186/s12868-022-00703-1  

小胶质细胞是在中枢神经系统 (CNS) 中发现的一种免疫细胞，约占大脑细胞的 10-15%。 它们去除受损的神经元，对维持中枢神经系统的健康很重要。 

在最近的一项研究中 BMC神经科学, 张 et al. 研究了自发荧光对小胶质细胞的影响。 据报道，老年动物的小胶质细胞会积聚脂褐素样自发荧光颗粒。 由于它们的位置和宽发射光谱，这些自发荧光颗粒可能被错误地识别为来自免疫荧光染色的荧光信号。 使用 TrueBlack® 脂褐素自发荧光淬灭剂，张 et al.，报告了 2 个月大的 Cx3cr1 固定脑切片小胶质细胞中自体荧光背景的显着降低^GFP 老鼠。 淬灭剂也不干扰一组靶向小胶质细胞蛋白的抗体。

小胶质细胞中自体荧光颗粒的成像 Cx3cr1 的固定脑切片^GFP 老鼠。 （左）经过和未经 TrueBlack® 脂褐素自发荧光淬灭剂处理的小胶质细胞的 Z 轴投影图像堆栈。 （右）图像中自发荧光的合规值。 （n = 17 个细胞，来自 3 只小鼠） ± 标准差，***p<0.001

图片来源：张等人。 https://doi.org/10.1186/ s12868-022-00703-1

• TrueBlack® 脂褐素自发荧光淬灭剂提高了树脂包埋中的信噪比 脑组织

Ren, M., Tian, J., Sun, Q., Chen, S., Luo, T., Jia, X., Jiang, T., Luo, Q., Gong, H., & Li, X. , (2021). 用于对标有多种荧光染料和蛋白质的大规模生物组织进行精确成像的塑料嵌入。 生物医学。 选择。 快递 12, 6730-6745。 https://doi.org/10.1364/BOE.435120

树脂嵌入是一种广泛使用的技术，用于保存结构信息，用于三维精细结构的可视化。 然而，树脂包埋中使用的化学处理与荧光染料不相容，也会导致荧光信号猝灭和信噪比差。

在最近发表于 生物医学光学任 et al. 开发了一种协议，该协议使用 TrueBlack® 脂褐素自发荧光淬灭剂来改进大型生物组织的树脂包埋。 他们证明，通过在甲基丙烯酸乙二醇酯包埋介质 (GMA-T) 中使用 0.7% TrueBlack® 脂褐素自发荧光淬灭剂，它可以有效减少组织中高达 90% 的自发荧光背景，同时保留比苏丹黑 B 多得多的荧光信号。这种树脂包埋器官的新方法为研究复杂的大脑结构提供了可靠的技术。

甲醇固定的成人脑组织切片中的脂褐素自发荧光图像。 （顶行）未经处理的组织。 脂褐素自发荧光出现在所有通道中。 （中间一排）经过处理的苏丹黑 B。 脂褐素自发荧光被掩蔽但在红色/远红色通道中引入了高背景。 （底行）TrueBlack® 脂褐素自发荧光淬灭剂。 脂褐素被背景最小增加所掩盖。 图片来源：Biotium

TrueBlack® 脂褐素自发荧光猝灭剂是一种出色的猝灭剂，可用于检测人神经元群体杂交链反应中的 mRNA

May-Zhang, AA、Benthal, JT 和 Southard-Smith, EM (2022)。 小鼠和人类冷冻切片中单细胞 mRNA 定位的杂交链反应。 当前协议，2(5)，e439。  https://doi.org/10.1002/cpz1.439

杂交链式反应 (HCR) 是一种用于核酸检测的等温信号放大方法。 HCR-荧光原位杂交 (HCR-FISH) 使研究人员能够可视化多个 RNA 靶标的表达。 经过几次迭代，目前的第三代 HCR (V3HCR) 现在可以清晰地检测 mRNA 到亚细胞甚至单分子分辨率。 然而，神经元细胞群中广泛存在的脂褐素自发荧光会干扰 HCR 信号并使分析复杂化。

在最近的 当前协议出版物, 张美 et al. 在 HCR 测定中测试了一组脂褐素淬灭方法（硫酸铜、Dent 固定剂漂白、洗涤剂提取、Murray 透明化、用 8% SDS 处理以及用苏丹黑 B 和 TrueBlack® 脂褐素自发荧光淬灭剂进行标准封闭）。 他们报告说，TrueBlack® 脂褐素自发荧光淬灭剂是消除脂褐素自发荧光最有效的淬灭剂，不会导致小鼠和人类冷冻组织中的 V3HCR 信号丢失。

为什么要使成像分析复杂化？ 使用 TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 开始去除背景自发荧光，以促进基于荧光的测定并使您的解释更容易！ 下载发布列表 发现更多经过验证的 TrueBlack® 脂褐素自发荧光淬灭剂应用。了解更多 关于 TrueBlack® 背景还原剂。

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案例

• TrueBlack® 脂褐素自体荧光淬灭剂在多种神经科学应用中的应用。 文学文摘。 (2022)。 https://biotium.com/wp-content/uploads/2022/12/Literature-Digest-TrueBlack-Neuro.pdf?utm_medium=email&utm_source=sharpspring&sslid=MzczsDCwMDM0tTS2BAA&sseid=MzI1MLEEAmNLAA&jobid=62fdd526-b851-4b86-8ddd-e558fbe1d2ac
• Zhang, H., Tan, C., Shi, X., & Xu, J. (2022)。 自发荧光对基于荧光的技术研究小胶质细胞的影响。 BMC 神经科学，23(1)，1-12。 https://doi.org/10.1186/s12868-022-00703-1
• Ren, M., Tian, J., Sun, Q., Chen, S., Luo, T., Jia, X., Jiang, T., Luo, Q., Gong, H., & Li, X. , (2021). 用于对标有多种荧光染料和蛋白质的大规模生物组织进行精确成像的塑料嵌入。 生物医学。 选择。 快递 12, 6730-6745。 https://doi.org/10.1364/BOE.435120

• May-Zhang, AA、Benthal, JT 和 Southard-Smith, EM (2022)。 小鼠和人类冷冻切片中单细胞 mRNA 定位的杂交链反应。 当前协议，2(5)，e439。  https://doi.org/10.1002/cpz1.439