1.微载体培养

制备消化后的细胞，将之前制备好的微载体加入方瓶或反应器中（微载体加入量3-5g/L），在一定条件下开始培养，4小时后观察细胞贴壁情况。 如果细胞粘附良好，继续跟随培养，观察细胞生长情况。

微载体培养操作要点

(1)培养初期：确保培养基和微球处于稳定的pH和温度水平，接种细胞（对数生长期，不稳定期）至培养基终体积的1/3，以增加细胞和微载体接触的机会。 经常使用2-3g/L的微载体含量，更高的微载体浓度需要环境控制或频繁更换液体。

由于动物细胞没有细胞壁，对剪切力很敏感，因此不可能通过提高搅拌速度来增加接触概率。 通常的操作方法是在粘附阶段使用低搅拌速度并始终搅拌。 几小时后，随着细胞附着在微载体表面上，搅拌过程停止。 而是在细胞进入培养阶段时设置低速。 微载体培养的搅拌速度很慢，最高速度为75r/min。

(2)贴壁阶段(3-8h)后，缓慢加入培养基至工作体积，提高搅拌速度，确保完全混合均匀。

(3)培养维持期：细胞计数（核计数）、葡萄糖测定和细胞形态显微镜检查。 随着细胞增殖，微球越来越重，需要加大搅拌速度（不同培养时间的载体细胞照片见图1至图3）约3天后，培养基开始呈酸性并且需要改变。 具体方法：停止搅拌，让Cell Dex静置5分钟，弃去适量培养液，缓慢加入新鲜培养液（37℃），重新搅拌。
(4) 收获细胞（这种消化方法可能需要使用胰酶消化器的离线灭菌）
A. 待消化的细胞通过无菌管道送入几乎灭菌的微载体消化器中。 培养基通过微载体消化器的过滤系统从消化器中排出，细胞过度生长的微载体被保留在微载体消化器上方。
B、将剩余载体体积的1~5倍体积的无钙镁PBS加入微载体消化器中，打开消化器的搅拌系统，使PBS与微载体充分接触，持续搅拌后排出无钙镁PBS 3~5分钟。
C. 用 PBS 按 B 相同方法重复清洗两次，排出不含钙镁的 PBS
D. 将含0.02%EDTA的PBS溶液加入PBS清洗过的微载体中，37℃连续搅拌约10分钟后出料
E.加入含0.125%胰蛋白酶和0.02%EDTA的胰蛋白酶75-125r/min，快速搅拌20-30min（显微镜下观察消化时间，载体上无细胞时停止消化）。

F. 消化后，消化后的细胞通过消化器的排水管转移到更大的生物反应器中。
(5)微载体培养的放大：可以通过增加微载体的含量或培养体积来放大。 使用非整倍体或原代细胞培养生产疫苗和干扰素已扩大到4000L以上。

2.Storage

储存于4~25°C干燥、通风、清洁的地方。

3。 运输

运输过程中避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒有害物品一起运输。

4。 警告

避免接触氧化剂。

5.订购说明

Celldex 以干粉形式提供，使用前必须进行水合和消毒。

图 1. Vero 细胞在 CellDex1 中培养 24h 的显微照片

图 2. Vero 细胞在 CellDex1 中培养 48h 的显微照片（320 x）

图 3。 Vero 细胞在 CellDex1 中培养 72h 的显微照片（320 x）