应变说明

NCG (NOD/ShiLtJGpt-Prkdcem26Cd52Il2rgem26Cd22/Gpt) 是通过使用基因编辑技术敲除 NOD/ShiltJGpt 小鼠的 Prkdc（蛋白激酶、DNA 活化、催化多肽）和 Il2rg（普通伽马链受体）基因而获得的严重免疫缺陷菌株。

NOD/ShiltJGpt的遗传背景使得该菌株携带先天性免疫缺陷，如补体系统和巨噬细胞缺陷； 同时，该背景下的Sirpa对人CD47具有很高的亲和力，使得NOD/ShiltJGpt比其他菌株更适合肿瘤和人细胞等人体移植物的定植。

Prkdc 基因的功能使 V(D)J 重组以及 T 细胞和 B 细胞的成熟成为不可能。

IL2RG 是多种白细胞介素细胞因子受体的共享亚基； IL2RG的失活会导致6个细胞因子信号通道的缺失，导致NK细胞缺陷。

鉴于此，NCG作为最彻底的免疫缺陷小鼠模型之一，非常适合细胞系来源的异种移植（CDX）、患者来源的异种移植（PDX）和人外周血单核细胞（PBMCs）的免疫重建。和人类造血干细胞 (CD34+ HSC) 移植。

由于其较长的生命周期（> 89 周），NCG 适用于长期移植和药效学评价。

应用领域

• 人源化免疫系统小鼠模型，如人源化BLT小鼠、人源化PBMC小鼠和人源化CD34⁺ 老鼠;
• 人细胞系来源的异种移植物、患者来源的异种移植物（CDX、PDX）；
• 疗效评价（小分子/大分子药物、联合疗法）；
• 人类癌症模型；
• 干细胞研究

验证数据

  1. NCG外周血免疫细胞亚群统计

图1 NOD、NOD-Scid和NCG小鼠外周血免疫细胞组分百分比统计图(n=5)

取 7 周龄 NOD、NOD-Scid 和 NCG 小鼠的外周血进行流式检测，以确定其免疫细胞组分的比例。 结果显示，与NOD相比，NOD-Scid几乎没有T细胞和B细胞，NK细胞比例代偿性增加，DC细胞、中性粒细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞比例增加，巨噬细胞比例减少。 与NOD相比，NCG几乎没有T、B、NK细胞和巨噬细胞，免疫缺陷比NOD-Scid更彻底。

 2. NCG脾脏免疫细胞亚群统计

图 2. NOD、NOD-Scid 和 NCG 小鼠脾脏免疫细胞组分百分比统计图(n=5)

取 7 周龄 NOD、NOD-Scid 和 NCG 小鼠的脾脏进行流式检测以确定它们的免疫细胞比例。 结果显示，与NOD相比，NOD-Scid几乎没有T细胞和B细胞，NK细胞比例代偿性增加，DC细胞、中性粒细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和巨噬细胞比例升高。 与NOD相比，NCG几乎没有T、B和NK细胞，免疫缺陷程度更高。

 3. NCG骨髓免疫细胞亚群统计

图3 NOD、NOD-Scid和NCG小鼠骨髓免疫细胞组分百分比统计图(n=5)

取7周龄NOD、NOD-Scid和NCG小鼠的骨髓进行流式检测以确定各亚群（造血干细胞、Pre-pro-B、Pro-B、Pre-B、未成熟B , Transitional B, Early mature B, Late mature B) 在 B 细胞生产过程中。 结果显示，与NOD相比，NOD-Scid和NCG小鼠骨髓中Pre-pro B细胞和Pro B细胞增多，而Pre B细胞、早/晚成熟B细胞含量减少。 此外，与 NOD 和 NOD-Scid 小鼠相比，NCG 小鼠骨髓中的移行 B 细胞显着增加。

4. 脾脏、胸腺和淋巴结的 NCG H&E 染色

图 4. NOD、NOD-Scid 和 NCG 小鼠脾脏、胸腺和淋巴结的 H&E 染色

将7周龄NOD、NOD-Scid和NCG小鼠的脾脏、胸腺和淋巴结在4% PFA中固定、石蜡包埋、切片、H&E染色，以确定其器官结构有无异常。 结果显示，NOD小鼠脾脏腹膜完整，未见增厚。 脾窦未扩张，脾小泡大小无异常改变，红白髓质比例基本正常； 胸腺完整，皮质和髓质正常，髓质内可见胸腺小泡，未见出血、萎缩等病理改变； 淋巴结皮质与髓质比例正常，淋巴细胞无减少或坏死。 相比之下，NOD-Scid和NCG小鼠的脾淋巴结体积缩小，淋巴细胞数量减少； 胸腺皮质和髓质分界不清，胸腺萎缩，皮质和髓质淋巴细胞明显减少； 淋巴结皮质和髓质界限不清，皮质萎缩，皮质和髓质淋巴细胞明显减少。 H&E阅读的结果与身体视觉和流动的结果一致。

此外，取7周龄NOD、NOD-Scid和NCG小鼠心脏、肝脏、肺、肾脏、结肠和睾丸（雄性）进行H&E染色。 结果表明，XNUMX株菌株均具有正常的器官组织结构。

 5. NCG器官指数及淋巴结数目

图 5. NOD、NOD-Scid 和 NCG 小鼠的器官指数和淋巴结数量比较 (n=10)

取7周龄NOD、NOD-Scid和NCG小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑和睾丸（雄性）进行器官称重，计算器官指数。 结果显示，与 NOD 小鼠相比，NOD-Scid 和 NCG 小鼠的脾脏指数显着降低，并且在 NCG 中降低更为显着。 其余器官指标无显着差异。

此外，通过对小鼠的颈部淋巴结、腋窝淋巴结、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结和配对淋巴结进行计数，结果表明，与NOD相比，NOD-Scid和NCG小鼠的淋巴结数量明显减少小鼠，而所有 NCG 小鼠均无腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结和配对淋巴结。

6. NCG增长曲线

图 6. NCG 小鼠的生长曲线

对 16 周大的 NCG 小鼠进行了体重分析。 结果表明，NCG雄性小鼠的体重普遍高于雌性小鼠。

7. 血常规分析

表 1. 7 周龄 NOD、NOD-Scid 和 NCG 小鼠的全血细胞计数分析

 8. 血液生化分析

表 2. 7 周龄 NOD、NOD-Scid 和 NCG 小鼠的血液生化分析

 9. NCG致瘤性试验

图 7. NCG 小鼠致瘤性试验

将人乳腺癌细胞系BT-474、人结肠癌细胞系COLO205、人胰腺癌细胞系PANC1和人卵巢癌细胞系SK-OV-3皮下接种到6-8周龄的Nu/NOD-Scid/NCG小鼠体内分别处于对数生长期，肿瘤大小随时间呈梯度曲线生长。 （肿瘤体积值表示为平均值±SEM）。

 10. NCG 功效测试

图8.厄洛替尼在NCG小鼠皮下移植肺癌PDX模型中的药效学评价

构建NCG小鼠皮下移植肺癌PDX模型，评价厄洛替尼的抗肿瘤作用。 结果显示，与模型对照组相比，厄洛替尼治疗组能够显着抑制肿瘤生长。 此外，与单独使用厄洛替尼组相比，与阿瓦斯汀联合使用可显着抑制肿瘤生长。 （肿瘤体积值表示为平均值±SEM）。

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