Kính hiển vi là đôi mắt của chúng ta nhìn vào thế giới vô hình, hé lộ những chi tiết phức tạp của sự sống và vật chất. Từ những vi sinh vật nhỏ nhất đến những cấu trúc phức tạp của vật liệu, kính hiển vi đã mở ra một vũ trụ kiến thức mà trước đây chúng ta không thể hiểu được.

Hình 1: Độ phân giải của mắt thường, kính hiển vi quang học và kính hiển vi điện tử.
Nguồn: Trung tâm học tập khoa học
Cuộc hành trình vào kính hiển vi bắt đầu vào cuối thế kỷ 16 khi Zacharias Jansen, một nhà sản xuất kính mắt người Hà Lan, được cho là người tạo ra kính hiển vi ghép đầu tiên. Phát minh mang tính đột phá này đã đặt nền tảng cho nhiều kỹ thuật đa dạng hiện có ngày nay. Các kỹ thuật này rất khác nhau tùy thuộc vào loại ánh sáng được sử dụng, cách hình ảnh được tạo ra và các ứng dụng cụ thể mà chúng phục vụ.
Trong quá trình khám phá này, chúng ta sẽ đi sâu vào thế giới hấp dẫn của các kỹ thuật kính hiển vi, khám phá các nguyên lý, khả năng và hạn chế cơ bản của chúng. Bằng cách hiểu được điểm mạnh và điểm yếu của các phương pháp tiếp cận khác nhau, các nhà nghiên cứu có thể lựa chọn kỹ thuật tối ưu để mở khóa những bí mật ẩn giấu trong các mẫu của họ.

1. Kính hiển vi trường sáng


Hình 2: Thiết lập quang học của kính hiển vi trường sáng (bên trái). Hình ảnh trường sáng của tế bào hành tây trong các giai đoạn khác nhau của nguyên phân (bên phải).
Nguồn: Câu lạc bộ kính hiển vi; Wikimedia Commons
Kính hiển vi trường sáng là một kỹ thuật cơ bản trong kính hiển vi, được sử dụng rộng rãi vì tính đơn giản và độ tin cậy của nó. Là một trong những phương pháp phổ biến nhất trong sinh học và y học, nó cho phép quan sát chi tiết nhiều mẫu khác nhau.
Kính hiển vi trường sáng hoạt động như thế nào?
Kính hiển vi trường sáng sử dụng hệ thống quang học cơ bản, trong đó ánh sáng được tụ lại bởi tụ quang, truyền qua mẫu vật và vào thấu kính vật kính. Hình ảnh thu được được hình thành do sự thay đổi cường độ ánh sáng do sự hấp thụ, phản xạ và khúc xạ ánh sáng của mẫu vật. Cơ chế tương phản này tạo ra mẫu tối trên nền sáng, do đó có tên như vậy. Kính hiển vi trường sáng hiệu quả nhất trên các mẫu mỏng, trong mờ có độ tương phản đủ. Độ tương phản này có thể vốn có trong mẫu vật, chẳng hạn như sắc tố tự nhiên hoặc được tăng cường nhân tạo thông qua các kỹ thuật nhuộm.
Ứng dụng của kính hiển vi trường sáng
Tính linh hoạt của kính hiển vi trường sáng mở rộng trên nhiều lĩnh vực. Các nhà sinh vật học và nhà khoa học y khoa sử dụng kỹ thuật này để kiểm tra tế bào, mô và vi sinh vật. Các nhà khoa học vật liệu cũng sử dụng kính hiển vi trường sáng để phân tích cấu trúc của vật liệu.
Hạn chế của kính hiển vi trường sáng
Mặc dù hiệu quả đối với các mẫu có độ tương phản đủ, kính hiển vi trường sáng bị thách thức bởi các mẫu trong suốt. Khả năng hình dung chi tiết của kỹ thuật này bị hạn chế bởi độ tương phản giữa mẫu và nền của nó.
2. Kính hiển vi trường tối


Hình 3: Thiết lập quang học của Kính hiển vi trường tối (Bên trái). Hình ảnh trường tối của Ceriodaphnia dubia (Phải).
Nguồn: Câu lạc bộ kính hiển vi; Wikimedia Commons
Ngược lại với kính hiển vi trường sáng, kính hiển vi trường tối tạo ra hình ảnh nổi bật bằng cách chặn ánh sáng trực tiếp đến thấu kính vật kính. Chỉ có ánh sáng tán xạ bởi chính mẫu vật mới đi vào thấu kính, tạo ra mẫu sáng trên nền tối.
Kính hiển vi trường tối hoạt động như thế nào?
Kính hiển vi trường tối đạt được độ tương phản cao bằng cách chặn ánh sáng trực tiếp chiếu tới mẫu vật. Với một tụ quang đặc biệt, ánh sáng được hướng vào mẫu vật từ các bên, tạo ra một hình nón chiếu sáng rỗng. Khi có mẫu vật, nó sẽ tán xạ ánh sáng, khiến ánh sáng đi vào thấu kính vật kính. Điều này tạo ra hình ảnh sáng của mẫu vật trên nền tối, tăng cường khả năng hiển thị, đặc biệt là đối với các mẫu không nhuộm màu và trong suốt.
Ứng dụng của kính hiển vi trường tối
Kính hiển vi trường tối đặc biệt hữu ích để quan sát các mẫu vật sống, không nhuộm màu, chẳng hạn như vi khuẩn, động vật nguyên sinh và xoắn khuẩn. Nó cũng được sử dụng trong khoa học vật liệu để phát hiện các hạt nhỏ và khuyết tật. Nó có hiệu quả để làm nổi bật các cấu trúc bề mặt, các khuyết tật và ranh giới trong các mẫu mờ đục.
Hạn chế của kính hiển vi trường tối
Nền tối có thể khiến việc quan sát các chi tiết nhỏ trong mẫu vật trở nên khó khăn, trong khi bụi và mảnh vụn có thể xuất hiện dưới dạng các vật thể sáng, có khả năng che khuất mẫu vật. Ngoài ra, cường độ ánh sáng cao cần thiết cho trường tối có khả năng làm hỏng các mẫu vật nhạy cảm.
3. Kính hiển vi tương phản pha
Kính hiển vi tương phản pha là một kỹ thuật mạnh mẽ để hình dung các mẫu vật trong suốt, chẳng hạn như tế bào sống, không đủ độ tương phản cho kính hiển vi trường sáng. Nó khai thác thực tế là các cấu trúc khác nhau trong một mẫu vật có chiết suất khác nhau, khiến ánh sáng truyền qua chúng với tốc độ khác nhau.
Kính hiển vi tương phản pha hoạt động như thế nào?
Một tụ quang và thấu kính vật kính đặc biệt được sử dụng để chuyển đổi sự khác biệt về pha (mắt người không nhìn thấy được) thành sự khác biệt về biên độ (có thể nhìn thấy được dưới dạng các biến thể về độ sáng). Điều này làm tăng độ tương phản của mẫu vật mà không cần nhuộm màu.
Ứng dụng của kính hiển vi tương phản pha
Kính hiển vi tương phản pha được sử dụng rộng rãi trong sinh học tế bào để nghiên cứu tế bào sống, quan sát cấu trúc nội bào và theo dõi các quá trình động. Nó cũng được sử dụng trong vi sinh học để kiểm tra vi khuẩn và các vi sinh vật khác.
Hạn chế của kính hiển vi tương phản pha
Hình ảnh tương phản pha thường hiển thị các hiện vật quầng sáng xung quanh các cạnh của cấu trúc, có thể làm mờ các chi tiết. Các vòng pha trong thấu kính vật kính có thể làm giảm nhẹ độ phân giải tổng thể so với kính hiển vi trường sáng. Nó cũng tốn kém hơn do yêu cầu về vật kính tương phản pha chuyên dụng và tụ quang hơn so với quang học trường sáng tiêu chuẩn.

Hình 4: Hình ảnh tế bào thần kinh đệm của con người trong chế độ Brightfield (trái) và chế độ tương phản pha (phải).
Nguồn: Kính hiển viU
4. Kính hiển vi tương phản giao thoa vi sai (DIC)

Hình 5: Hình ảnh DIC (a, c, e) và Độ tương phản pha (b, d, f) của tế bào biểu mô niêm mạc má của người (a, b), một phần dày của mô thận chuột (c, d) và thân polyp dạng vòng Obelia quanh sarc
Nguồn: Khoa học sự sống Olympus
Kính hiển vi tương phản giao thoa khác biệt (DIC), còn được gọi là tương phản giao thoa Nomarski, là một kỹ thuật tinh vi tạo ra hình ảnh nổi bật, gần giống 3D của các mẫu vật trong suốt. Nó rất tuyệt vời trong việc phát hiện những thay đổi nhỏ trong chiết suất bên trong mẫu.
Kính hiển vi DIC hoạt động như thế nào?
DIC sử dụng ánh sáng phân cực và một loạt các thành phần quang học để tạo ra hai chùm ánh sáng hơi lệch nhau đi qua mẫu vật. Sự khác biệt về độ dài đường đi quang học giữa các chùm tia này, do sự thay đổi trong chiết suất của mẫu vật, dẫn đến các mẫu giao thoa tạo ra hình ảnh.
Ứng dụng của kính hiển vi DIC
DIC đặc biệt hữu ích để nghiên cứu các mẫu sinh học không nhuộm, chẳng hạn như tế bào sống, phôi và vi sinh vật. Kỹ thuật này cũng có giá trị trong khoa học vật liệu để kiểm tra các vật liệu trong suốt hoặc mờ.
Hạn chế của kính hiển vi DIC
Kính hiển vi DIC phù hợp nhất với các mẫu mỏng, trong suốt có sự thay đổi chiết suất tinh tế. Hiệu quả của nó giảm đáng kể đối với các mẫu dày hơn, chẳng hạn như các phần mô hoặc các mẫu có sắc tố mạnh. Vì DIC yêu cầu các thành phần quang học chuyên dụng nên nó làm tăng tổng chi phí của hệ thống kính hiển vi.
5. Kính hiển vi huỳnh quang trường rộng
Kính hiển vi huỳnh quang trường rộng là một kỹ thuật cơ bản chiếu sáng toàn bộ mẫu bằng ánh sáng kích thích để quan sát các cấu trúc được đánh dấu huỳnh quang.
Làm thế nào Kính hiển vi huỳnh quang trường rộng hoạt động?
Huỳnh quang xảy ra khi một chất huỳnh quang hấp thụ ánh sáng ở một bước sóng cụ thể (kích thích) và phát ra ánh sáng ở bước sóng dài hơn. Để hình dung các phân tử mục tiêu, các đầu dò liên hợp với chất huỳnh quang, chẳng hạn như kháng thể hoặc đầu dò axit nucleic, được sử dụng để dán nhãn cụ thể các thành phần quan tâm. Sau đó, mẫu được chiếu sáng bằng ánh sáng kích thích và huỳnh quang phát ra được thu thập bởi thấu kính vật kính. Một bộ lọc truyền ánh sáng phát ra một cách chọn lọc trong khi chặn ánh sáng kích thích, tạo ra hình ảnh trong đó các cấu trúc huỳnh quang xuất hiện sáng trên nền tối.
Ứng dụng của Kính hiển vi huỳnh quang trường rộng
Kính hiển vi huỳnh quang trường rộng được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu sinh học để nhuộm miễn dịch huỳnh quang nhằm phát hiện và định vị các protein cụ thể. Nó cũng được sử dụng trong lai tạo tại chỗ để nghiên cứu các kiểu biểu hiện gen và hình ảnh tế bào để hình dung cấu trúc và động lực của tế bào.
Hạn chế của Kính hiển vi huỳnh quang trường rộng
Mặc dù đa năng, kính hiển vi huỳnh quang trường rộng vẫn có một số hạn chế. Ánh sáng phát ra từ các vùng trên và dưới mặt phẳng tiêu cự góp phần gây nhiễu nền, làm giảm độ rõ nét và độ tương phản của hình ảnh, đặc biệt là trong các mẫu dày. Tiếp xúc lâu dài với ánh sáng kích thích có thể làm hỏng các mẫu nhạy sáng. Nồng độ huỳnh quang thấp có thể dẫn đến tín hiệu huỳnh quang yếu.
6. Kính hiển vi cùng tiêu điểm



Hình 7: Hình ảnh 3D của kính hiển vi trường rộng (a, c và e) và kính hiển vi cộng hưởng (b, d và f) của các tế bào biểu mô được gắn nhãn bằng DAPI (DNA nhân-xanh lam), Alexa 488-phalloidin (chủng sợi actin-xanh lục), và MitoTracker Red (ty thể-đỏ) (a, b), lát cắt thận chuột dày ∼20 μm, được gắn nhãn bằng DAPI (DNA nhân-xanh lam), Alexa 488-gôm lúa mì agglutinin (màng nhuộm màu xanh lục), và Alexa 568-phalloidin (sợi actin-đỏ) (c, d), và nuôi cấy 3D của tế bào biểu mô vú MCF-10A hình cầu dày ∼50 μm, được gắn nhãn bằng protein huỳnh quang xanh lục nhân và protein huỳnh quang đỏ đánh dấu màng (e, f).
Nguồn: doi: 10.7171/jbt.15-2602-003
Kính hiển vi cộng hưởng là một kỹ thuật mạnh mẽ khắc phục được những hạn chế của kính hiển vi huỳnh quang trường rộng bằng cách cải thiện đáng kể độ phân giải và độ tương phản của hình ảnh.
Kính hiển vi cộng hưởng hoạt động như thế nào?
Kính hiển vi cộng hưởng sử dụng tia laser để quét mẫu từng điểm một. Một lỗ kim được đặt ở phía trước máy dò, chỉ cho phép phát hiện ánh sáng phát ra từ mặt phẳng tiêu cự. Điều này loại bỏ hiệu quả ánh sáng ngoài tiêu cự, tạo ra hình ảnh sắc nét hơn.
Kính hiển vi cộng hưởng sử dụng nhiều kỹ thuật khác nhau để đạt được hình ảnh có độ phân giải cao:
- Kính hiển vi quét laser cộng hưởng (LSCM): Đây là phương pháp phổ biến nhất, sử dụng chùm tia laser tập trung để quét mẫu từng điểm một. Mặc dù phương pháp này cung cấp chất lượng hình ảnh đặc biệt, nhưng có thể tốn thời gian, đặc biệt là đối với các mẫu lớn hoặc hình ảnh trực tiếp.
- Kính hiển vi đĩa quay confocal: Kỹ thuật này sử dụng đĩa quay có nhiều lỗ kim để chiếu sáng đồng thời các phần khác nhau của mẫu, tăng tốc độ thu thập hình ảnh. Do đó, nó thường được ưa chuộng cho các quy trình động như hình ảnh tế bào sống.
- Kính hiển vi mảng lập trình (PAM): Tương tự như đĩa quay, nó sử dụng một mảng lỗ kim có hoa văn, nhưng có tính linh hoạt hơn trong việc kiểm soát hoa văn chiếu sáng. Tuy nhiên, loại kính hiển vi cộng hưởng này ít được sử dụng rộng rãi hơn so với hai loại kia.
Ứng dụng của kính hiển vi cộng hưởng
Kính hiển vi cộng hưởng được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu sinh học và y sinh để nghiên cứu cấu trúc tế bào, vị trí protein và các quá trình động. Nó đặc biệt có giá trị để chụp ảnh các mẫu vật dày, chẳng hạn như mô và phôi, do khả năng tạo ra các mặt cắt quang học.
Hạn chế của kính hiển vi cộng hưởng
Mặc dù kính hiển vi cộng hưởng có nhiều ưu điểm đáng kể so với kính hiển vi trường rộng truyền thống, nhưng nó cũng có một số hạn chế. Do bản chất quét điểm của kính hiển vi cộng hưởng, việc thu thập hình ảnh có thể chậm, đặc biệt là đối với các tập dữ liệu lớn hoặc hình ảnh có độ phân giải cao. Ánh sáng laser mạnh được sử dụng trong kính hiển vi cộng hưởng có thể làm hỏng hoặc tẩy trắng các mẫu huỳnh quang, hạn chế thời gian quan sát và ảnh hưởng đến chất lượng dữ liệu. Kính hiển vi cộng hưởng đắt tiền để mua và bảo trì, đòi hỏi thiết bị chuyên dụng và nhân viên được đào tạo.
Khám phá các loại thuốc nhuộm tế bào của Atlantis Bioscience bao gồm phalloidin, DNA nhân, màng tế bào, ty thể và nhiều loại khác nữa!
7. Kính hiển vi đa photon / hai photon

Hình 7: So sánh giữa kính hiển vi cộng hưởng và kính hiển vi kích thích hai photon. (Bên phải) Hình ảnh đám rối màng mạch cá mập nhuộm huỳnh quang. Độ tương phản của hình ảnh cộng hưởng (A) bị suy giảm đáng kể ở 70 µm, trong khi sự kích thích hai photon cho phép thu thập hình ảnh với độ tương phản cường độ tuyệt vời ngay cả ở 140 µm. (Trái)
Nguồn: doi: 10.1371 / tạp chí.pbio.0030207
Kính hiển vi đa quang hoặc kính hiển vi hai quang là một kỹ thuật hình ảnh tiên tiến vượt xa khả năng của kính hiển vi cộng hưởng truyền thống. Nó cho phép thâm nhập mô sâu hơn và giảm độc tính của ánh sáng, khiến nó trở thành một công cụ vô giá để nghiên cứu các hệ thống sống.
Kính hiển vi đa quang hoạt động như thế nào?
Thay vì sử dụng một photon đơn lẻ để kích thích các chất huỳnh quang, kính hiển vi đa photon sử dụng hai hoặc nhiều photon đồng thời chiếu vào một chất huỳnh quang, khiến nó phát ra một photon đơn lẻ có năng lượng cao hơn. Vì ánh sáng kích thích nằm trong phổ hồng ngoại nên nó thâm nhập sâu hơn vào mô so với ánh sáng khả kiến được sử dụng trong kính hiển vi cộng hưởng, cho phép chụp ảnh các mẫu dày hơn. Do năng lượng của ánh sáng kích thích thấp hơn nên nguy cơ hư hỏng do ánh sáng đối với mẫu được giảm đáng kể.
Ứng dụng của kính hiển vi đa quang
Kính hiển vi đa quang có khả năng chụp ảnh các mẫu vật sống dày nhờ các đặc tính độc đáo của nó. Nó phù hợp cho các nghiên cứu không xâm lấn chụp ảnh các cấu trúc não, sự phát triển phôi thai và sinh lý học của cơ quan do khả năng thâm nhập sâu hơn vào mô. Do độc tính với ánh sáng giảm, nó cho phép chụp ảnh tế bào sống và quan sát lâu dài các quá trình tế bào động mà không gây ra thiệt hại đáng kể. Nó cũng cung cấp khả năng trong cơ thể chụp ảnh để nghiên cứu các quá trình sinh học trong các sinh vật còn nguyên vẹn, chẳng hạn như mô hình động vật mắc bệnh.
Những hạn chế của kính hiển vi đa quang
Thiết bị chuyên dụng cần thiết, bao gồm laser femto giây công suất cao và máy dò nhạy, khiến cho kính hiển vi đa quang trở thành một kỹ thuật tốn kém. Mặc dù sâu hơn kính hiển vi cộng hưởng, độ sâu thâm nhập vẫn bị hạn chế bởi sự tán xạ và hấp thụ ánh sáng trong mô. Không phải tất cả các chất huỳnh quang đều hiệu quả đối với sự kích thích hai photon, hạn chế sự lựa chọn các tác nhân đánh dấu.
Bạn đang tìm kiếm thuốc nhuộm phalloidin để chụp ảnh 2 photon? Khám phá các hợp chất phalloidin của chúng tôi với các tùy chọn thuốc nhuộm để chụp ảnh siêu phân giải và 2 photon
8. Kính hiển vi huỳnh quang phản xạ toàn phần bên trong (TIRF)


Hình 8: Cơ sở vật lý của huỳnh quang epi và chiếu sáng TIRF (A, B).
So sánh hình ảnh thu được bằng cách sử dụng epifluorescence và TIRF (C, D)
Nguồn doi: 10.1242/jcs.056218
Kính hiển vi TIRF là một kỹ thuật huỳnh quang chuyên dụng có độ nhạy và độ phân giải không gian đặc biệt cho các quá trình hình ảnh diễn ra gần bề mặt tế bào.
Kính hiển vi TIRF hoạt động như thế nào?
Khi ánh sáng trải qua phản xạ toàn phần bên trong tại giao diện giữa hai môi trường có chiết suất khác nhau (ví dụ, thủy tinh và nước), một sóng evanescent được tạo ra. Sóng này xuyên qua một khoảng cách ngắn (thường là 100-200 nm) vào môi trường thứ hai. Chỉ có các chất huỳnh quang trong trường evanescent được kích thích, giảm thiểu huỳnh quang nền từ dung dịch khối. Điều này dẫn đến tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu cao.
Ứng dụng của kính hiển vi TIRF
TIRF rất hữu ích trong việc hình dung động lực học màng, chẳng hạn như tương tác thụ thể-phối tử, vận chuyển túi và protein, nội bào, nhiễm virus, tương tác tế bào-chất nền trên bề mặt tế bào hoặc động lực học bộ khung tế bào.
Hạn chế của kính hiển vi TIRF
Một nhược điểm của kính hiển vi TIRF là phải sử dụng tế bào nuôi cấy bám dính, hạn chế việc sử dụng cho tế bào huyền phù hoặc một số loại mô nhất định.
9. Kính hiển vi siêu phân giải

Hình 9: Hình ảnh TauSTED tế bào sống của tế bào U2OS, sử dụng nhãn cho actin (SiR-actin, phát sáng), vi ống (SPY555-tubulin, màu lục lam) và màng (CF488A ghép nối với WGA, màu xanh lục).
Nguồn: Leica Microsystems
Kính hiển vi siêu phân giải là tập hợp các kỹ thuật vượt qua giới hạn nhiễu xạ vốn thường hạn chế độ phân giải của kính hiển vi quang học. Lĩnh vực đột phá này đã cách mạng hóa sự hiểu biết của chúng ta về các quá trình tế bào và phân tử.
Kính hiển vi siêu phân giải hoạt động như thế nào?
Giới hạn nhiễu xạ, một hạn chế vật lý do bản chất sóng của ánh sáng áp đặt, hạn chế độ phân giải của kính hiển vi quang học thông thường ở mức xấp xỉ 200 nm. Các kỹ thuật siêu phân giải sử dụng nhiều chiến lược khác nhau để vượt qua hạn chế này, cho phép chụp ảnh ở cấp độ nano (5-20 nm). Nhìn chung, các kỹ thuật siêu phân giải liên quan đến việc định vị chính xác các chất huỳnh quang trong mẫu và tái tạo tính toán để kết hợp thông tin từ nhiều khung hình hoặc phép đo để tạo ra hình ảnh có độ phân giải cao. Bằng cách thao tác các đặc tính phát xạ của chất huỳnh quang hoặc sử dụng ánh sáng có cấu trúc, các kỹ thuật này vượt qua các hạn chế do bước sóng ánh sáng áp đặt.
Một số kỹ thuật siêu phân giải đã được phát triển, mỗi kỹ thuật có cách tiếp cận riêng:
- Suy giảm phát xạ kích thích (STED): Sử dụng tia laser thứ hai để hạn chế phát xạ huỳnh quang trong một vùng nhỏ, giúp tăng độ phân giải một cách hiệu quả.
- Kính hiển vi chiếu sáng có cấu trúc (SIM): Sử dụng ánh sáng có hoa văn để tạo ra các hoa văn giao thoa giúp tăng cường chi tiết hình ảnh.
- Kính hiển vi định vị quang hoạt hóa (PALM) và Kính hiển vi tái tạo quang học ngẫu nhiên (STORM): Dựa vào việc bật và tắt có kiểm soát từng chất huỳnh quang để xác định chính xác vị trí của chúng.
Kính hiển vi siêu phân giải hoạt động như thế nào?
Kính hiển vi siêu phân giải đã tìm thấy ứng dụng trong nhiều lĩnh vực ở cấp độ nano. Bao gồm nghiên cứu về tổ chức cấu trúc tế bào và động lực của các tương tác phân tử, chụp ảnh cấu trúc tinh tế của các khớp thần kinh và mạng lưới nơ-ron, mô tả đặc điểm vật liệu nano và các đặc tính của chúng, và nghiên cứu cơ sở phân tử của các bệnh.
Hạn chế của kính hiển vi siêu phân giải?
Kính hiển vi siêu phân giải, mặc dù cung cấp chi tiết chưa từng có, nhưng cũng phải đối mặt với một số thách thức. Khi độ phân giải tăng lên, các yêu cầu và hạn chế về mặt kỹ thuật trở nên rõ rệt hơn. Những yêu cầu này bao gồm nhu cầu về chất huỳnh quang chuyên dụng, khả năng nhạy cảm với các yếu tố môi trường như rung động và khả năng gây độc tính với ánh sáng. Ngoài ra, các hệ thống siêu phân giải phức tạp và tốn kém, thường đòi hỏi đầu tư đáng kể vào thiết bị và chuyên môn. Việc cân bằng mong muốn có độ phân giải cao hơn với các cân nhắc thực tế, chẳng hạn như tính toàn vẹn của mẫu và hiệu quả về mặt chi phí, là điều cần thiết để chụp ảnh siêu phân giải thành công.
Hãy xem qua thuốc nhuộm CF® và thuốc nhuộm tế bào đã được xác thực của chúng tôi dành cho Kính hiển vi siêu phân giải.
Tài liệu tham khảo:
Bhakdi SC, Thaicharoen P. Dễ dàng sử dụng và phát hiện bảy chất huỳnh quang không có nhiễu xuyên âm trong kính hiển vi huỳnh quang trường rộng. Phương pháp giao thức. 2018;1(2):20. Xuất bản ngày 2018 tháng 1 năm 10.3390. doi:1020020/mpsXNUMX
Jonkman J, Brown CM. Bất kỳ cách nào bạn cắt nó - So sánh các kỹ thuật kính hiển vi cộng hưởng. J Biomol Tech. 2015 tháng 26; 2 (54): 65-10.7171. doi: 15 / jbt. 2602-003-25802490. PMID: 4365987; PMCID: PMCXNUMX.
Mattheyses AL, Simon SM, Rappoport JZ. Chụp ảnh bằng kính hiển vi huỳnh quang phản xạ toàn phần dành cho nhà sinh học tế bào. Tế bào J. 2010;123(Pt 21):3621-3628. doi:10.1242/jcs.056218
Piston DW. Khi hai tốt hơn một: các yếu tố của kính hiển vi trong cơ thể. Sinh học PLoS. 2005;3(6):e207. doi:10.1371/journal.pbio.0030207
https://www.sciencelearn.org.nz/images/526-resolving-power-of-microscopes
https://www.aps.org/apsnews/2004/03/lens-crafters-1590-invention-microscope
https://www.microscopeclub.com/bright-field-microscope
https://www.microscopeclub.com/dark-field-microscopy
https://www.microscopyu.com/techniques/phase-contrast/introduction-to-phase-contrast-microscopy
https://www.olympus-lifescience.com/en/microscope-resource/primer/techniques/dic/dicphasecomparison
https://ibidi.com/content/215-widefield-fluorescence
https://www.leica-microsystems.com/science-lab/super-resolution-microscopy-image-gallery