การทดสอบการตรวจจับเอ็กโซโซม TRIFic™ ให้ข้อมูลที่ชัดเจนและสม่ำเสมออย่างรวดเร็วโดยให้ข้อมูลเชิงปริมาณจากตัวอย่างที่ทำให้บริสุทธิ์หรือไม่บริสุทธิ์ รวมถึงการตรวจวัดโดยตรงของเอ็กโซโซมในพลาสมาในรูปแบบ 96 หลุมที่สะดวก คล้ายกับการทดสอบ ELISA แต่ตรวจพบเป้าหมายโดยตรงด้วยฉลาก Europium โดยไม่มีปฏิกิริยาทางเอนไซม์ การทดสอบการตรวจหา exosome ของ TRIFic™ จัดทำขึ้นสำหรับเครื่องหมาย exosome ที่ใช้กันอย่างแพร่หลาย เพื่อให้สามารถระบุ CD9+/CD81+/CD63+ – EVs

ฉันจะเลือกชุด Exo-spin™ ใดสำหรับปริมาตรตัวอย่างของฉัน

หลักการทดสอบ

โดยทั่วไปแล้วเอ็กโซโซมจะมีสำเนาเตตระสแปนินหลายชุดที่หันไปทางพื้นผิวของสิ่งที่แนบมาและโมเลกุลของเครื่องหมายเพิ่มเติมที่พร้อมใช้งานสำหรับการตรวจจับ ตามคุณสมบัตินี้ การสอบวิเคราะห์ประกอบด้วยโมโนโคลนัลแอนติบอดี (ที่ติดฉลากด้วยไบโอติน) ที่จับกับเพลตที่เคลือบสเตรปทาวิดินซึ่งจับโปรตีนที่มีอยู่บนพื้นผิวของเอ็กโซโซม (ดูด้านล่าง) ต่อจากนั้น ใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่เหมือนกัน (ติดฉลากยูโรเพียม) เพื่อตรวจหา

เอ็กโซโซมจัดให้มีโครงสร้างในอุดมคติเพื่อเชื่อมโยงโมเลกุล CD9, CD63 หรือ CD81 และยอมให้ตรวจหาเตตระสแปนินที่สนใจ การใช้ยูโรเพียมฟลูออโรฟอร์ให้ระดับความไวสูงสำหรับการทดสอบ ซึ่งสามารถตรวจพบการเปลี่ยนแปลงเล็กน้อยในความอุดมสมบูรณ์ของโปรตีนเตตระสแปนินเป้าหมายแม้ภายในตัวอย่างทางชีววิทยาที่ซับซ้อนที่ไม่บริสุทธิ์ เช่น พลาสมาเลือดและน้ำไขสันหลัง (CSF)

ภาพรวมโปรโตคอล

ขั้นตอนที่ 1 แอนติบอดีไบโอตินิลเลตถูกจับกับแผ่นทดสอบที่เคลือบด้วยสเตรปทาวิดิน

ขั้นตอนที่ 2 ตัวอย่างชีวภาพที่มี exosomes จะถูกเพิ่มลงในจาน เอ็กโซโซมที่มีแอนติเจนที่เหมาะสม (CD9, CD63 หรือ CD81) และแอนติเจนอิสระใดๆ ถูกจับโดยแอนติบอดีที่ถูกตรึง

ขั้นตอนที่ 3 แอนติบอดีที่ติดฉลาก Europium ถูกเติมและจับกับแอนติเจนภายนอกโดยเฉพาะ แอนติเจนอิสระไม่ถูกผูกมัดโดยแอนติบอดีที่ติดฉลากยูโรเพียม (เนื่องจากอีพิโทปถูกครอบครองโดยแอนติบอดีที่ถูกตรึงแล้ว) ดังนั้นจึงตรวจไม่พบ ตัวอย่างจะถูกอ่านในเครื่องอ่านเพลทเรืองแสงที่แก้ไขเวลา

ฟลูออโรฟอร์

ฟลูออโรฟอร์เป็นสารเคมีที่ปล่อยแสงหลังจากการกระตุ้นด้วยแสงหรือการแผ่รังสีแม่เหล็กไฟฟ้าอื่นๆ การปล่อยแสงจากฟลูออโรฟอร์จะสูงสุดทันทีหลังการกระตุ้นและสลายตัวในช่วงระยะเวลาหนึ่ง การวัดค่าฟลูออริเมทรีแบบกำหนดเวลาใช้ฟลูออโรฟอร์ซึ่งมีระยะเวลาการสลายที่ยาวนาน สำหรับฟลูออโรฟอร์ดังกล่าว การวัดแสงที่ปล่อยออกมาสามารถทำได้เมื่อไม่มีแสงกระตุ้นอีกต่อไป ซึ่งจะเป็นการเพิ่มความไว

ยูโรเพียม

ยูโรเพียมเป็นฟลูออโรฟอร์ที่สร้างการสลายตัวของการปล่อยรังสีที่ขยายออกไปและมีการเปลี่ยนแปลงสโตกส์ที่กว้างด้วยการกระตุ้นสูงสุดที่ 340 นาโนเมตร และการปล่อยสูงสุดที่ 615 นาโนเมตร การทดสอบ TRIFic™ เป็นการทดสอบอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์แบบใช้เวลา ซึ่งใช้ยูโรเพียม และได้รับการพัฒนาเพื่อวัดปริมาณโปรตีน CD9, CD63 หรือ CD81 ที่สัมพันธ์กันโดยเฉพาะกับ exosome ในของเหลวชีวภาพ เช่น ปัสสาวะ น้ำลาย อาหารเลี้ยงเซลล์ น้ำไขสันหลัง (CSF) และพลาสมาเลือด

การใช้งาน

การทดสอบการตรวจจับ TRIFic™ เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการตรวจหาเครื่องหมายเฉพาะของเอ็กโซโซม สำหรับตัวอย่างที่ทำให้บริสุทธิ์หรือไม่บริสุทธิ์

[หีบเพลง]
[ชื่อหีบเพลง =”ข้อมูลผลิตภัณฑ์”]

การไทเทรตของเอ็กโซโซมบริสุทธิ์โดยใช้การทดสอบเอ็กโซโซม TRIFic™ แสดงความสัมพันธ์เชิงเส้นตรงระหว่างปริมาณของเอ็กโซโซมและหน่วย TRF (หน่วยเรืองแสงที่แก้ไขเวลาได้) ในช่วงกว้าง การทดสอบนี้สามารถตรวจจับระดับไมโครกรัมย่อยของเอ็กโซโซมได้ 

ตัวอย่างทางชีวภาพ (เจือจาง 1:1 หรือ 1:5 ด้วย PBS) ที่ถูกแทงด้วยเอ็กโซโซมบริสุทธิ์แสดงให้เห็นถึงความไวของการทดสอบแม้ในของเหลวทางชีวภาพที่ซับซ้อน เช่น พลาสมาและน้ำไขสันหลัง

การวิเคราะห์ TRIFic™ ของ CD9 ในตัวอย่างปัสสาวะของผู้ป่วยมะเร็ง 20 ตัวอย่าง ซึ่งแสดงให้เห็นเนื้อหาภายนอกที่หลากหลาย

การทดสอบการตรวจจับภายนอกด้วย TRIFic™ บนตัวอย่างที่ไม่บริสุทธิ์

การทดสอบเอ็กโซโซม CD9 TRIFic™ ดำเนินการสำหรับสายพันธุ์ของเซลล์ที่หลากหลาย (n=2) สามารถทดสอบตัวอย่างมากกว่า 80 ตัวอย่างพร้อมตัวควบคุม exosome ได้ด้วยชุดเครื่องมือเดียว  

การตรวจหาเครื่องหมาย Exosome สำหรับเซลล์มะเร็ง

การตรวจจับเครื่องหมายบน exosomes จากเซลล์มะเร็งต่อมลูกหมากโดยใช้ TRIFic™ จุดข้อมูลแต่ละจุดแสดงถึงค่าเฉลี่ย (n=3)

การตรวจหาเครื่องหมายบน exosomes จากเซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่และทวารหนักโดยใช้ TRIFic™ จุดข้อมูลแต่ละจุดแสดงถึงค่าเฉลี่ย (n=3)

อัตราส่วนสัญญาณต่อช่องว่างของการตรวจหา CD81 บน exosomes จากเซลล์มะเร็งต่อมลูกหมาก เพื่อให้ได้ค่าเฉลี่ยของจุดข้อมูล

อัตราส่วนสัญญาณต่อช่องว่างของการตรวจหา CD81 บน exosomes จากเซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่และทวารหนัก เพื่อให้ได้ค่าเฉลี่ยของจุดข้อมูล

[/หีบเพลง]

[ชื่อหีบเพลง =”คู่มือผู้ใช้”] EX101_CD9_TRIFic_User_Guide CD63__clone_CGS73B__แผ่นข้อมูล. CD81__clone_CGS36K__แผ่นข้อมูล[/หีบเพลง]

[ชื่อหีบเพลง =”MSDS/เอกสารทางเทคนิค”] TRIFic_kits_MSDS[/หีบเพลง]
[ชื่อหีบเพลง =”โบรชัวร์ผลิตภัณฑ์”] CellGS exosome โบรชัวร์.pdf[/หีบเพลง]
[/หีบเพลง]