1.마이크로캐리어 문화

소화된 세포를 준비하고 미리 준비한 미세담체를 사각플라스크나 반응기에 넣고(미세담체 첨가 3-5g/L), 일정한 조건에서 배양을 시작하고 4시간 후 세포의 부착을 관찰한다. 세포가 잘 부착되면 배양을 계속하고 세포 성장을 관찰하십시오.

미세담체 배양 조작의 요점

(1) 배양 초기 단계: 배지 및 마이크로스피어가 안정적인 pH 및 온도 수준에 있는지 확인하고 세포(안정기가 아닌 대수 성장기)를 배양 배지의 최종 부피의 1/3로 접종하여 세포를 증가시킵니다. 및 마이크로캐리어 접촉의 기회. 2-3g/L의 미세담체 함량이 자주 사용되며, 더 높은 미세담체 농도는 환경 제어 또는 빈번한 액체 교체가 필요합니다.

동물세포는 세포벽이 없고 전단력에 민감하기 때문에 교반속도를 높여 접촉확률을 높이는 것은 불가능하다. 일반적인 작동 방법은 접착 단계에서 낮은 교반 속도를 사용하고 항상 교반하는 것입니다. 세포가 미세담체 표면에 부착됨에 따라 교반 과정은 몇 시간 후에 중단됩니다. 대신 세포가 배양 단계에 들어갈 때 저속이 설정됩니다. 미세담체 배양물의 교반은 매우 느리고 최대 속도는 75r/min입니다.

(2) 부착 단계(3-8h) 후, 배양 배지를 작업 부피에 천천히 추가하고 교반 속도를 증가시켜 완전한 균질 혼합을 보장합니다.

(3) 배양 유지 기간: 세포 수(핵 수), 포도당 측정 및 세포 형태 현미경 검사. 세포가 증식함에 따라 마이크로스피어가 무거워지고 교반 속도를 증가시켜야 합니다. (다른 배양 시간의 캐리어 세포 사진은 그림 1에서 그림 3에 나와 있습니다.) 약 3일 후, 배양 배지는 산성을 띠기 시작합니다. 변경해야 합니다. 구체적인 방법: 교반을 중지하고 Cell Dex가 5분 동안 침전되도록 하고 적절한 양의 배양 용액을 버리고 새로운 배양 용액(37°C)을 천천히 추가하고 교반을 다시 시작합니다.
(4) 세포 수확
A. 소화될 세포는 멸균 파이프라인을 통해 거의 멸균된 마이크로캐리어 소화조에 공급됩니다. 배양 배지는 미세담체 분해조의 필터 시스템을 통해 소화조에서 배출되고, 세포가 과도하게 자란 미세담체는 미세담체 분해조 위에 유지됩니다.
B. microcarrier digester에 남아있는 carrier의 calcium-magnesium free PBS의 1~5배 부피를 첨가하고, digester의 교반장치를 열고 PBS를 microcarrier와 완전히 접촉하게 하고, 계속 교반한 후 calcium-magnesium free PBS를 배출한다. 3~5분 동안
C. B와 같은 방법으로 PBS로 XNUMX회 세척을 반복하고 칼슘-마그네슘이 없는 PBS를 배출한다.
D. PBS로 세척한 미세담체에 0.02% EDTA를 포함하는 PBS 용액을 첨가하고 37℃에서 약 10분 동안 계속 교반한 후 배출하였다.
E. 0.125% 트립신과 0.02% EDTA 75-125r/min을 포함하는 트립신을 추가하고 20-30분 동안 빠르게 저어줍니다(소화 시간은 현미경으로 관찰되며 담체에 세포가 없을 때 소화가 중지됨).

F. 소화 후 소화된 세포는 소화조의 배수관을 통해 더 큰 생물 반응기로 옮겨집니다.
(5) 미세담체 배양의 Scale-up: 미세담체의 함량이나 배양 부피를 증가시켜 규모를 확장할 수 있습니다. 백신과 인터페론을 생산하기 위한 이수성 또는 4000차 세포 배양의 사용은 XNUMXL 이상으로 증폭되었습니다.

2.Storage

4~25°C의 건조하고 통풍이 잘되며 깨끗한 장소에 보관하십시오.

3. 수송

운송 중 햇빛, 비, 강한 압력을 피하고 유독성 및 위험 물질과 함께 운송하는 것은 엄격히 금지되어 있습니다.

4.주의

산화제와의 접촉을 피하십시오.

5. 주문 지시

Celldex는 건조 분말로 공급되며 사용하기 전에 수화 및 멸균해야 합니다.

그림 1. CellDex1에서 24시간 배양한 Vero 세포의 현미경 사진

그림 2. CellDex1에서 48시간 배양한 Vero 세포의 현미경 사진(320 x)

그림3. CellDex1에서 72시간 동안 배양한 Vero 세포의 현미경 사진(320 x)